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影响花药培养的因素<-->植物组织培养技术与花药培养技术的比较
月季的花药培养实验操作 〖内容〗 (1)材料的选取: 选择花药时,一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期(单核期)。确定花粉发育时期的最常用的方法有醋酸洋红法。但是,某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用焙花青-铬矾法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 一般来说,在单核期,细胞核由中央移向细胞一侧的时期,花药培养成功率最高。为了挑选到单核期的花药,通常选择完全未开放的花蕾。 (2)材料的消毒: 通常先将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡大约30s,立即取出,在无菌水中清洗。取出后再用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2-4min(也可用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液),取出后再用无菌水冲洗3-5次。 (3)接种和培养: 灭菌后的花蕾,要在无菌条件下除去萼片和花瓣,并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时,要尽量不损伤花药(否则接种后容易从受伤部位长生愈伤组织),同时还要彻底去除花丝,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 通常每瓶接种花药7~10个,培养温度控制在25℃左右,不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般经过20~30天培养后,会发现花药开裂,长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上,以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体,则一个花药内就会产生大量幼小植株,必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开,分别移植到新的培养基上,否则这些植株将很难分开。 还需要对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。
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