实验：叶绿体中色素的提取和分离

实验：叶绿体中色素的提取和分离
一、实验原理：
1、叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮（或酒精、汽油、苯、石油醚等）中，又因为丙酮有毒性，所以，一般实验室用酒精提取叶绿体中的色素。
2、层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。这样，最终不同的光合色素会在扩散过程中分离开来。
二、实验装置：

三、实验结果：
　　四种色素中，含量最多的是叶绿素a，色素带最宽的也是叶绿素a；
　　含量最少（色素带最窄）的是胡萝卜素；
　　扩散速度最快的是胡萝卜素，扩散速度最慢的是叶绿素b；
　　相邻两条色素带之间距离最远的是胡萝卜素和叶黄素，最近的是叶绿素a和叶绿素b。

四、注意事项
1、研磨时加入二氧化硅的目的是为了研磨充分，更有效地破坏细胞结构；但由于二氧化硅是特别细的白色粉末，再加上控制不好用量，往往过量，使滤液中含有较多的二氧化硅，而导致滤液颜色变浅。滤液中杂质越多，实验现象越不明显。
　　有实验证明，改用白细河沙（冼净干燥后用）代替二氧化硅粉末，这样研磨更充分，减少了滤液中杂质的含量，颜色变得深绿，实验效果明显。
2、加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。因为叶绿素分子结构中含有镁原子，当细胞破裂时，细胞液内有机酸中的氢可取代镁原子而成为褐色的去镁叶绿素，碳酸钙可中和有机酸以防止去镁反应的发生。
3、研磨要迅速、充分。迅速是因为丙酮容易挥发；充分是为了使叶绿体完全破裂，打破细胞膜、叶绿体膜和类囊体膜，从而能提取较多的色素；叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。
4、制备滤纸条时，根据小孔（边缘）扩散原理，物质分子沿边缘扩散速度要大于里边扩散的速度，因此要将滤纸条的一端剪去两角，主要是为了延长边缘长度，这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀，便于观察实验结果。
5、画线时，一定要细并且直，这样可以防止色素带重叠，使色素分子均匀分布在一条直线上，做到扩散起点一致。
　　重复划2~3次，是为了增加滤液细线上的色素分子数量，使实验效果更加明显。
　　制备滤纸条画滤液细线时只能用铅笔，不能用钢笔或圆珠笔代替，否则，其颜色会遮盖色素的颜色。
6、分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线没及到层析液，这是因为色素易溶解于层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。

绿叶中色素的种类和作用<-->光反应阶段

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